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内标定量与外标定量比照 ？？？？

2016-07-07 16:23
  由于古板定量要领都是终点检测，，，，，即PCR抵达平台期后举行检测，，，，，而PCR经由对数期扩增抵达平台期时，，，，，检测重现性极差。。。。。统一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验，，，，，所得效果有很大差别，，，，，因此无法直接从终点产品推算出起始模板量。。。。。加入内标后，，，，，可部分消除终产品定量所造成的禁绝确性。。。。。但纵然云云，，，，，古板的定量要领也都只能算作半定量、简陋定量的要领。。。。。  内标定量：若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，，，，，则PCR反应变为双重PCR，，，，，他们之间保存两种模板之间的滋扰和竞争，，，，，尤其当两种模板的起始拷贝数相差较量大时，，，，，这种竞争会体现得更为显著。。。。。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，，，，，以是无法加入合适数目的已知模板作为内标，，，，，也正是这个缘故原由，，，，，古板定量要领虽然加入内标，，，，，但仍然只是一种半定量的要领。。。。。  外标定量：外标法不是把标准物质加入到被测样品中，，，，，而是与被测样品在相同条件下举行检测。。。。。由于在荧光定量PCR中，，，，，Ct值与起始模板的对数保存线性关系，，，，，因此可以使用标准曲线对未知样品举行定量测定，，，，，并且在PCR循环刚刚进入真正的指数扩增期时，，，，，Ct值的重现性极好，，，，，即统一模板差别时间扩增或统一时间差别管内扩增，，，，，获得的Ct值是恒定的，，，，，因此定量的效果也会准确许多。。。。。  美国Texas大学的科研职员举行了外标法定量和内标法定量的要领学较量，，，，，得出的结论是：内标法作为定量或半定量的手段是不可靠的，，，，，而外标准曲线的定量要领是一种准确的、值得信任的科学要领。。。。。【Ke LD, Chen Z, Yung WK.A reliability test of standard-based quantitative PCR: exogenous vs endogenous standards. Mol.Cell Probes,2000,14(2):127-135】
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